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1대의 HPLC 시스템에서 방향족 화합물에 대한 분석용 HPLC 분석법의 프렙용 HPLC로의 Scale-up
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작성자 : 사이언스21 | 조회: 18 | 날짜: 2019-10-10 15:44:06

PLC 시스템은 펌프헤드를 50, 250, 또는 500mL/min 용 중에서 선택이 가능하고 내경이 4~100mm인 컬럼을 수용할 수 있는 고성능 크로마토그래피이므로 mg~g 단위의 천연물, 펩타이드, 화합물 등의 시료를 재현성 있고 신속하게 분리, 분취할 수 있기 때문에 분석용에서 프렙용으로 Scale-up을 한 기기에서 할 수 있는 장점을 가지고 있다. 분석용에서 프렙용 HPLC 컬럼으로 Scale-up을 하기 위하여 4개의 화합물로 구성된 시료를 사용하였다. 먼저 LaChrom Elite 분석 용 HPLC 시스템으로 Method development를 하여 조건을 잡은 후 PLC 시스템으로 이전시켜서 같은 시스템에 Semi prep 컬럼을 장착하여 Scale-up을 진행하였다.





실험 기기

▶ Gilson PLC 2050 system
•Max Flow rate: 50mL/min
•Max Pressure: 300bars
•Quaternary gradient pump
•UV-VIS DAD detector(200~840nm)
•Gilson Glider Prep Software
•Analytical and semi-prep injection valves


▶ LaChrom Elite Analytical HPLC systems
• Max Flow rate: 5mL/min
•Max Pressure: 400bars
•Binary gradient pump
•UV-VIS DAD detector
•EZChrom Elite Software


▶ Method
• Hydroquinone, Pyrocatechol, Phenol 0.5g/L 혼합물과 Piperine 0.01g/L
•Eluent A: Phosphate buffer(0.02M, pH=5.5 adjusted with NaOH 6N)
Eluent B: Methanol
•Method: 20% Eluent B, 3min;
              from 20% to 90% of B, 7min;
              90% of B, 20min
•Detection: UV/VIS detector at 280nm


실험 결과 및 고찰
▶ 분석용 20uL Injection:
Merck Purosphere PR 18e 250mm X 4.6 I.D. 5um with pre column


▶ 프렙용 1mL Injection:
Merck Lichrosphere 100 RP-18 250mm X 25 I.D. 5um


그림 설명: 280nm에서의 HPLC 크로마토그램. Hydroquinone, Pyrocatechol, Phenol, 그리고 Piperine을 A) 분석용 컬럼과 LaChrom EliteTM(Hitachi); B) 분석용 컬럼과 Gilson PLC 2050 personal chromatography system; 그리고 C) 프렙용 컬럼과 Gilson PLC 2050을 이용하여 분리하였다.


결론
Gilson PLC 2050 시스템은 4.6mm ID 분석용 컬럼을 설치하여 시료 Injection을 했을 때에도 재현성 있는 결과를 산출하고 동일 기기에 25mm ID semi-prep 또는 100mm ID의 Prep 컬럼을 설치하여 Scaleup을 수행할 때에도 높은 효율을 보여준다.


Reference(참고문헌): Gilson Application Note ENV0214
Model Name(모델명): PLC 2050
The Person in Charge(담당자): Hyesook An
Maker(제조사): Gilson
Country of Origin(원산지): France
e-mail:
kaisco1@kaisco.co.kr
Data Services(자료제공): KAISCO

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