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Eppendorf Amber Conical Tubes:빛에 민감한 샘플 보호 및 가시성을 최대화한 앰버 코니컬 튜브
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작성자 : 사이언스21 | 조회: 5 | 날짜: 2019-04-08 15:32:48


Abstract
빛에 민감한 시약 또는 샘플의 취급 및 보관은 일반적으로 단색 UV / VIS 스펙트럼 범위에서 광투과를 감소시키거나 완전히 차
단하는 Amber-Colored Plastic Tube에서 수행된다.
샘플 보호 기능은 우수하지만 대다수의 앰버(Amber) 튜브는 불투명하고 직접 샘플을 볼 수 없는 주요 단점이 있다.


본고에서는 여러 Amber Conical Tube에서 샘플을 빛으로부터 보호하고(Fluorescein Recovery Assay) 샘플 가시성(Transmission Spectrum)을 관찰하였다. 테스트한 모든 튜브는 200nm에서 550nm 사이의 파장 범위에서 매우 낮은(0%에 가까운) 광 투과 결과를 보였으며 이는 빛에 민감한 샘플(거의 100%의 플루오레세인 회수율)의 보호가 우수함을 나타내었다.


이 중 Eppendorf Amber Conical Tube는 550nm 이상의 범위에서 적당히 투명하며 샘플의 가시성, 취급 및 오염 방지와 관련하여 분명한 이점을 제공하는 유일한 튜브임을 확인하였다.


Introduction
많은 종류의 빛에 민감한 시약과 샘플이 실험실에서 사용된다. 빛에 노출되면 수명이나 활성도이 급격히 감소 할 수 있어 후속 분석 및 실험에 악영향을 미칠 수 있다.


이러한 어려움을 피하기 위해 빛에 민감한 시약과 샘플은 직접적인 빛에 노출되지 않도록 취급하고 보관해야 한다. 일반적으로 사용되는 앰버(Amber) 색상의 실험용 플라스틱 튜브는 다양한 볼륨 형식으로, 특히 에너지가 풍부한 짧은 파장의 UV / VIS 스펙트럼에서 빛의 전송을 줄이거나 완전히 차단하므로 빛에 민감한 샘플을 안전하게 보관하고 취급 할 수 있다. 훌륭한 샘플 보호 기능을 제공하는 반면, 대부분의 튜브에는 큰 단점이 있다. 불투명해서 직접 샘플을 볼 수 없다.


본 고에서는 다양한 Amber Conical Tube의 샘플 광 보호(Fluorescein Recovery Assay)와 샘플 가시성(Transmission Spectrum)을 조사했다.


Materials and Methods
샘플 광보호: 플루오레세인 회수 측정

감광성 플루오레신 용액(Excitation 최대: 495nm)을 사용하여 일광에 92시간 노출되었을 때 감광성 샘플을 보호하는 튜브의 성능을 평가하였다. 다양한 제조업체(Eppendorf, Gr, V, Ar, Lc)의 50mL Amber Conical Tube에 0.1 M NaOH로 희석한 30nM 형광 물질 용액 30mL를 채웠다.
표준(투명) Eppendorf 50mL Conical Tube를 음성 대조군(광 보호제 없음)으로 사용하고 표준(투명제) Eppendorf 50mL Conical Tube를 알루미늄 호일로 감싸서 양성 대조군(최대 광 보호)으로 사용했다. 튜브를 닫고 일광(실험실의 평균 일광 및 램프 조명 조건) 또는 암실에서 실온에서 92시간 동안 배양했다. 배양 후 Fluoroskan Ascent(Thermo Scientific)의 형광 측정을 위해 각 튜브에 저장된 플루오레신 용액 190μL를 사용했다. 각 튜브는 3번씩 테스트하였고 2회의 독립적인 실험이 수행되었다.


샘플 가시성: 투과 스펙트럼 측정
투과 스펙트럼은 USP 660 및 "유색 유리 용기용 분광 투과율"에 대한 Eur. Ph. 3.2.1 챕터를 따른 방식을 이용하여 측정하였다 [1].

Eppendorf, Gr, V, Ar 및 Lc의 각 50mL Amber Conical Tube의 벽에서 약 5 x 5mm의 두 섹션을 잘라 냈다. 절편을 물로 씻고 건조시
킨 다음 렌즈 조직으로 닦았다. 그런 다음 분광광도계 Eppendorf사 BioSpectrometer에서 흡광도를 측정 할 수있는 홀더에 넣었다. 200nm와 650nm 사이의 범위를 커버하는 흡광도 스펙트럼이 각 벽면에 생성되었으며 이는 생명 과학 분야에서 사용되는 대부분의 염료 / 발색단의 흡광도 최대 값을 포함하는 스펙트럼 범위에 해당한다. Reference / Blank 샘플은 단면(공기)이 없는 측정으로 구성된다.
흡광도 데이터(A)는 다음 식에 기초하여 백분율 투과율 데이터(T)로 변환 되었다: A = 2 - log10 % T.


Results and discussion


다른 제조업체의 Amber Conical Tube는 색상 강도와 불투명도 측면에서 큰 차이를 보인다.
그림 1에서 보듯이 색상 범위는 중간 갈색에서 검은 색까지 다양하며 투명도 / 샘플 가시성은 대부분의 경우 0 또는 0에 가깝다.
Eppendorf Amber Conical Tubes는 다른 튜브에 비해 색상 강도가 현저히 낮으며 튜브 속을 볼 수 있을 정도로 투명하다. 이점이 샘플 핸들링 시 매우 큰 이점을 나타낸다. 이러한 투명 가시성은 사용자가 피펫 팁의 삽입 깊이를 완전히 컨트롤하고 피펫 오염을 피할 뿐만 아니라 샘플의 위치를 정확히 볼 수 있게 한다.



Eppendorf 50mL Conical Tube(Clear 타입 및 Amber 타입)에서 92시간 동안 배양 한 후 형광 물질 샘플(샘플 광 보호)의 회수율을 그림 2에 나타내었다.



투명한 타입에 비해 Eppendorf Amber Tube는 매우 높은 형광 물질 회수율을 보이며 거의 100% 샘플 보호 기능을 제공한다.
타사 Amber Tube에서 배양된 형광 물질 샘플의 회수율은 비슷하였다. (데이터는 표시되지 않음)
대조군을 분석한 결과, 플루오르세틴이 빛에 충분히 민감하다는 것을 확인하였다.(음성 대조군: 일광 조건 하에서 배양 된 클리어 튜브에서의 낮은 회수율)


반면, 플루오르세틴의 비특이적 분해는 관찰되지 않았다.(양성 대조군 : 알루미늄 호일로 감아 놓은 튜브의 정상적인 회수율)
Amber Tube에서 측정에 영향을 미치고 편견을 줄 수 있는 형광 활성 물질의 침출 가능성을 위해 추가적인 대조 실험이 수행되었다.
대조군 플루오레세인 희석액(0.1M NaOH) (*Fluorescein: 형광 염료 중 하나, 형광 지시약)만을 92시간 배양 후, 테스트한 튜브 모두 배양 샘플에서 형광이 증가되지 않았다.



그림3에서 Amber Conical Tube의 투과 스펙트럼(서로 다른 파장에서의 광 투과율)을 비교하였다.
테스트한 Amber Conical Tube 모두 200~550nm 파장 범위에서 측정시 0%에 가까운 광 투과율로 우수항 광 보호 특성을 보였다.
이것은 진단 및 기타 응용 분야 외에 생경과학 분야에서 사용되는 대부분의 염료 및 형과 물질의 활성 범위이다. 550nm 이상에서 Eppendorf Amber Conical Tube는 투과율이 적당히 증가하였는데 이는 튜브의 밝은 갈색과 연계하여 샘플의 가시성을 좋게 한다.

이 투과 스펙트럼은 생명과학,제약 및 화학실험실에서 일상적으로 사용하는 Amber Glass Vessel의 투과 스펙트럼과 유사하며 이 분야에서 표준으로 설정된 분광 투과율의 각각의 제한을 따른다.[2]


Conclusions
본 고에서 테스트한 50mL Amber Tube 모두 빛에 민감한 샘플을 효과적으로 보호함을 보여 주었다. 이는 일반적인 조명 조건에서 92시간 동안 배양 한 후 형광 물질 샘플의 회수율이 높음으로 알 수 있다.(거의 100%) 이 결과는 또한 200nm와 약 550nm 사이의 파장의 에너지가 풍부한 범위에서 매우 낮은 광 투과를 알 수 있다.(0%에 가까운)


Eppendorf사 Amber Conical Tube는 550nm 파장 범위 에서 투명함을 보이는 유일한 튜브이며, 이는 빛에 민감한 샘플의 최대 보호는 물론 핸들링시 샘플을 볼 수 있는 장점이 있다.


Reference(참고문헌): [1] Glass Containers for Pharmaceutical Use(3.2.1) p. 363;
                                     European Pharmacopeia 7.0;01/2008
                               [2] Spectral Transmission for Colored Glass Containers; 4(660)
                                     Containers--Glass / Physical
                               [3] Eppendorf Application note 403
Data Services(자료제공): Eppendorf Korea
The Person in Charge(담당자): Lee Haegyeong
Maker(제조사): Eppendorf
e-mail(이메일):
cs@eppendorf.kr
Country of Origin(원산지): Germany
Model Name(모델명): Eppendorf Amber Conical Tubes

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